細(xì)胞培養(yǎng)基的基本介紹

基本介紹

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)必需的溶液

平衡鹽水（BSS）：Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液。PH調(diào)整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）

細(xì)胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。

抗生素溶液：

1)青、鏈霉素，每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素。

2)卡那霉素：終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。

3）制霉菌素：濃度25U/ml，小瓶分裝，每瓶一次用完。

常用的動(dòng)物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清，前者來(lái)源少，價(jià)格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因?yàn)椴溉楹蟮男∨Ｑ逯锌赡芎懈鼜?fù)雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。

氨基酸是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，氨基酸中有12種是細(xì)胞本身不合成的，必須由培養(yǎng)液提供。激素有胰島素、生長(zhǎng)激素和多種生長(zhǎng)因子如表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、增殖刺激因子(MSA)、類胰島素生長(zhǎng)因子(IGFl、IGF2)等。

水解乳蛋白、膠原是另外兩種較好的天然培養(yǎng)基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物，呈蛋黃色粉末狀，富含氨基酸。一般配制成0．5%溶液，微酸性。膠原是從動(dòng)物真皮中提取的，具改善細(xì)胞表面特性促使其附著生長(zhǎng)的作用。

合成培養(yǎng)基

1951年厄爾開(kāi)發(fā)了供動(dòng)物細(xì)胞體外生長(zhǎng)的人工合成培養(yǎng)基(MEM)。合成培養(yǎng)基的種類相當(dāng)多。合成培養(yǎng)基成分已知，便于對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無(wú)法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細(xì)胞培養(yǎng)中使用的基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。普遍的作法是加入小牛血清。

動(dòng)物血清成分復(fù)雜，各種生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)很有效，但后期對(duì)培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、提純以及檢測(cè)造會(huì)成一定困難。另外高質(zhì)量的動(dòng)物血清來(lái)源有限，成本高，限制了它的大量使用。

無(wú)血清培養(yǎng)基不加動(dòng)物血清，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細(xì)胞生長(zhǎng)有效因子，激素等。